Отправить статью по E-mail 
In ovo — метод выделения первичных зародышевых клеток из эмбриональной крови генофондных пород кур
- Авторы: Пегливанян Г.К.1, Ларкина Т.А.1, Рейнбах Н.Р.1, Дысин А.П.1, Габова А.В.1, Полтева Е.А.1, Рябова А.Е.1, Азовцева А.И.1
-
Учреждения:
- Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
- Выпуск: Том 67, № 2 (2025)
- Страницы: 111-118
- Раздел: Статьи
- URL: https://jdigitaldiagnostics.com/0041-3771/article/view/685022
- DOI: https://doi.org/10.31857/S0041377125020057
- EDN: https://elibrary.ru/FVKVDB
- ID: 685022
Цитировать
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Аннотация
Несмотря на ключевую роль примордиальных зародышевых клеток (ПЗК) в направленном изменении генома, существуют значительные трудности с эффективностью их выделения. В настоящей работе представлен новый метод (in ovo — внутри яйца) выделения из эмбриональной крови генофондных пород кур, который имеет важное значение для сохранения генетических ресурсов птиц и создания новых инновационных инструментов в области биотехнологии. ПЗК выделяли из крови эмбрионов кур различных пород (5 пород, 192 четырехсуточных эмбриона) и далее оценивали способность их к культивированию в течение 20 сут. Для анализа эффективности метода были проведены эксперименты по отбору проб крови у 192-х эмбрионов исследуемых пород кур и дальнейшее культивирование ПЗК. Результаты оценивали с применением однофакторного дисперсионного анализа ANOVA. Выявлено, что эффективность отбора образцов зависит от массы яйца и породы. Самый высокий показатель эффективности выделения ПЗК демонстрировали яйца китайской шелковой породы (89.5 %). Анализ данных культивирования ПЗК показал увеличение пролиферации клеток к 20-м сут. Наибольшую выживаемость наблюдали у китайской шелковой породы (69.1±2.56 %), у кур пород царскосельская (68.78±3.39 %) и род-айленд (67.9±2.2 %). Результаты показали пригодность метода in ovo для выделения ПЗК из 4-суточных эмбрионов кур и его большую эффективность, в отличие от методов, описанных в литературе.
Ключевые слова
Полный текст
Об авторах
Г. К. Пегливанян
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Автор, ответственный за переписку.
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинТ. А. Ларкина
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинН. Р. Рейнбах
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинА. П. Дысин
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинА. В. Габова
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинЕ. А. Полтева
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинА. Е. Рябова
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинА. И. Азовцева
Федеральный исследовательский центр животноводства — ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста
Email: Peglivanian_grig@mail.ru
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных
Россия, Санкт-Петербург, г. ПушкинСписок литературы
- Баркова О. Ю., Ларкина Т. А., Крутикова А. А., Пегливанян Г. К. 2023. Идентификация примордиальных зародышевых клеток (РGС) кур пушкинской породы с помощью ПЦР в реальном времени. Птицеводство. № 1. С. 10—15 (Barkova O. Y., Larkina T. A., Krutikova A. A., Peglivanyan G. K. 2023. Identification of primordial germ cells (PGC) of Pushkin breed chickens by real-time PCR. Poultry Science. № 1. P. 10.) https:// doi: 10.33845/0033-3239-2022-72-1-10-15
- Крутикова А. А., Пегливанян Г. К. 2025. Способ получения примордиальных половых клеток птиц. Патент № 2832977 C1, Российская Федерация, МПК C12N5/07, C12N5/10, C12N5/16. (Krutikova A. A., Peglivanyan G. K. 2025. Method of obtaining primordial germ cells of birds. Patent No. 2832977 C1б, Russian Federation, IPC C12N5/07, C12N5/10, C12N5/16.)
- Пегливанян Г. К., Ларкина Т. А., Рейнбах Н. Р., Полтева Е. А., Дысин А. П., Рябова А. Е., Азовцева А. И., Крутикова А. А. 2024. Особенности криоконсервации и декриоконсервации примордиальных половых клеток пушкинской породы кур. Биотехнология. 2024. Т. 40. № 5. С. 29. (Peglivanyan G. K., Larkina T. A., Reynbach N. R., Polteva E. A., Dysin A. P., Ryabova A. E., Azovtseva A. I., Krutikova A. A. 2024. Features of cryopreservation and decryoconservation of primordial germ cells of the Pushkin chicken breed. Biotechnology. 2024. V. 40, no. 5. P. 29.) https:// doi.org/10.56304/S0234275824050090
- Challagulla A., Jenkins K. A., O’Neil T.E., Morris K. R., Wise T. G., Tizard M. L., Bean A. G.D., Schat K. A., Doran T. J. 2023. Germline engineering of the chicken genome using CRISPR/Cas9 by in vivo transfection of PGCs. Animal Biotechnol. V. 34. P. 775—784. https://doi.org/10.1080/10495398.2020.1789869
- Chojnacka-Puchta L., Sawicka D., Lakota P., Plucienniczak G., Bednarczyk M., Plucienniczak A. 2015. Obtaining chicken primordial germ cells used for gene transfer: in vitro and in vivo results. J. Applied Genetics. V. 56. P. 493. https://doi.org/10.1007/s13353-015-0276-7
- Fujimoto T., Ukeshima A., Kiyofuji R. 1976. The origin, migration and morphology of the primordial germ cells in the chick embryo. Anat. Record. V. 185. P. 139. https://doi.org/1002/ar.1091850203
- Han J. Y., Park Y. H. 2018. Primordial germ cell-mediated transgenesis and genome editing in birds. J. Animal Sci. Biotechnol. V. 9. P. 1. https://doi.org/10.1186/s40104-018-0234-4
- Han J. Y., Park T. S., Hong Y. H., Jeong D. K., Kim J. N., Kim K. D., Lim J. M. 2002. Production of germline chimeras by transfer of chicken gonadal primordial germ cells maintained in vitro for an extended period. Theriogenology. V. 58. P. 1531. https://doi.org/10.1016/S0093-691X(02)01061-0
- Houston D. W., King M. L. 2000. A critical role for Xdazl, a germ plasm-localized RNA, in the differentiation of primordial germ cells in Xenopus. Development. V. 127. Art. ID: 447. https://doi.org/10.1242/dev.127.3.447
- Kang S. J., Choi J. W., Park K. J., Lee Y. M., Kim T. M., Sohn S. H., Han J. Y. 2009. Development of a pheasant interspecies primordial germ cell transfer to chicken embryo: Effect of donor cell sex on chimeric semen production. Theriogenology. 2009. V. 72. P. 519. https://doi.org/10.1016/j.2009.04.007
- Kong L., Qiu L., Guo Q., Chen Y., Zhang X., Chen B., Chang G. 2018. Long-term in vitro culture and preliminary establishment of chicken primordial germ cell lines. PLoS One. V. 13. Art. ID: e0196459. https://doi.org/10.1371/0196459.
- Lee H. C., Choi H. J., Lee H. G., Lim J. M., Ono T., Han J. Y. 2016. DAZL expression explains origin and central formation of primordial germ cells in chickens. Stem Cells Devel. V. 25. P. 68—79. https://doi.org/10.1089/scd.2015.0208
- Macdonald J., Glover J. D., Taylor L., Sang H. M., McGrew M.J. 2010. Characterisation and germline transmission of cultured avian primordial germ cells. PloS one. V. 5. Art. ID: e15518. https://doi.org/10.1371/0015518
- Maegawa S., Yasuda K., Inoue K. 1999. Maternal mRNA localization of zebrafish DAZ-like gene. Mech. Devel. V. 81. P. 223. https://doi.org/10.1016/S0925-4773(98)00242-1
- Mathan, Zaib G., Jin K., Zuo Q., Habib M., Zhang Y., Li B. 2023. Formation, application, and significance of chicken primordial germ cells: Rev. Animals. V. 13. Art. ID: 1096. https://doi.org/10.3390/13061096
- Ono T. Exo ovo culture of avian embryos. 2000. Dev. Biol. Protocols. V. I. P. 39. https://doi.org/10.1385/1-59259-685-1:39
- Perry M. M. 1988. A complete culture system for the chick embryo. Nature. V. 331. P. 70.
- Petitte J. N., Mozdziak P. E. 2014. Production of transgenic poultry. In: Transgenic Animal Technol.: Elsevier. P. 335. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-410490-7.00012-8
- Rengaraj D., Won S., Han J. W., Yoo D., Kim H., Han J. Y. 2020. Whole-transcriptome sequencing-based analysis of DAZL and its interacting genes during germ cells specification and zygotic genome activation in chickens. Int. J. Mol. Sci. V. 21. Art. ID: 8170. https://doi.org/10.3390/ijms21218170
- Tsunekawa N., Naito M., Sakai Y., Nishida T., Noce T. 2000. Isolation of chicken vasa homolog gene and tracing the origin of primordial germ cells. Development. V. 127. P. 2741. https://doi.org/10.1242/dev.127.12.2741
- Zhang X., Xian R., Fu Y., Dai Y., Peng R. 2023. A novel, efficient method to isolate chicken primordial germ cells from embryonic blood using cell culture inserts. Animals, V. 13. Art. ID: 3805. https://doi.org/10.3390/13243805
- Yasuda Y., Tajima A., Fujimoto T., Kuwana T. 1992. A method to obtain avian germ-line chimaeras using isolated primordial germ cells. J. Reprod. Fert. V. 96. P. 521. https://doi.org/10.1530/jrf.0.0960521
- Whyte J., Glover J. D., Woodcock M., Brzeszczynska J., Taylor L., Sherman A., Kaiser P., McGrew M.J. 2015. FGF, insulin, and SMAD signaling cooperate for avian primordial germ cell self-renewal. Stem Cell Reports. V. 5. P. 1171. 10.1016/.2015.10.008' target='_blank'>https://doi: 10.1016/.2015.10.008
Дополнительные файлы
